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插入序列(IS)检测试剂盒测试任何感兴趣的 DNA 样本中是否存在所有已知的大肠杆菌 IS 元素。
SKU:IS-1109-10Category:IS DetectionDescriptionDescription< p>插入序列 (IS) 检测试剂盒可检测任何感兴趣的 DNA 样本中是否存在所有已知的大肠杆菌 IS 元件。IS 元件天然存在于通常用于蛋白质的大肠杆菌菌株的基因组中IS 元件转座受到细胞应激反应的刺激,可导致 IS 元件转入质粒 DNA 和染色体的其他区域。复制质粒诱导应激反应。为了消除这些不需要的和潜在的灾难性转座事件,所有已知的 IS 元件都已从 Clean Genome® 大肠杆菌菌株中移除,从而为重组蛋白或质粒 DNA 的安全和可重复生产创造了理想的宿主。该试剂盒还可检测大肠杆菌基因组中是否存在已知重组热点 (Rhs)。
IS 检测试剂盒性能为证明试剂盒性能,我们在三种不同的大肠杆菌中制备了 pBR322 质粒菌株(DH10B、K-12 和 Clean Genome®)。此外,生产宿主未知的第四个 pBR322 质粒购自知名商业供应商。 PCR分析质粒 DNA 的 s 显示 IS 污染是常规的,除非您使用 Clean Genome® 大肠杆菌。请注意,IS 元素在商业质粒制备中经常被检测到:
试剂盒组件阳性对照基因组DNA:170 μL,足以分析10个样本。阴性对照基因组DNA:170 μL , 足以分析 10 个样本。IS 特定的正向 (F) 和反向(R) 引物:每种引物各 80 μL,浓度为 5 μM,足以分析 10 个样品。
正向引物反向引物IS1 正向引物IS1 反向引物IS2 正向引物IS2 反向引物IS3/ISEc17 正向引物IS3/ISEc17 反向引物IS4 正向引物IS4反向引物IS5正向引物IS5反向引物IS10正向引物IS10反向引物IS30D正向引物IS30D反向引物IS150正向引物IS150反向引物IS186正向引物IS186反向引物IS600/ISsd1正向引物IS600/ISsd1反向引物IS609正向引物IS609反向引物IS911正向引物IS911反向引物ISEc1/3/5正向引物ISEc1/3/5反向引物ISEc4正向引物ISEc4 反向引物RhsA/B/C 正向引物RhsA/B/C 反向引物RhsD/E 正向引物RhsD/E 反向引物Positive Control dnaE 正向和反向引物:每种引物各60 μL,浓度为5 μM,足以用于分析10个样品。
质量控制IS检测引物组功能正常使用阳性和阴性对照基因组 DNA 并按照插入序列检测试剂盒方案中描述的程序进行离子测试。还包括 DNA 聚合酶 III、dnaE 的引物,作为样本基因组 DNA 质量的阳性对照。 dnaE 是一种必需基因,存在于所有大肠杆菌中。该试剂盒和反应条件已使用 New England Biolabs 的 Phusion™ 高保真 DNA 聚合酶进行了验证。如果对反应条件进行了适当的优化,则可以使用其他热稳定的 DNA 聚合酶。在 1.0% 1X TAE 琼脂糖凝胶上分析 6 微升 PCR 扩增产物。当加水代替模板 DNA 时,看不到任何产物。
储存储存在 ≤ -20 °C。请勿储存在无霜冰箱中。
插入序列检测试剂盒协议
运输和处理该试剂盒使用干冰运输,运输和处理是额外的。对于美国订单,shipp荷兰国际集团和处理是145美元。对于美国境外的订单,手续费为 50 美元加上实际运费。请提供我们可能用于支付运费的 Fedex 帐号。
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