基于阵列的方法和基于下一代测序(NGS)的方法都用于研究表观遗传修饰。有三种基于NGS的常见方法可用于表观遗传分析:甲基序列,ChIP序列和ATAC序列。
Methyl-seq 用单核苷酸分辨率研究基因组的甲基化状态。该方法采用亚硫酸氢盐处理,可将胞嘧啶残基转化为尿嘧啶,而甲基化残基则保持不变。已经开发了几种甲基序列策略,包括全基因组亚硫酸氢盐测序(WGBS)和简化表示的亚硫酸氢盐测序(RRBS),这丰富了CpG岛。
ChIP-seq将染色质免疫沉淀(ChIP)与NGS结合使用,以鉴定整个基因组中与DNA相关的蛋白质的结合位点,通常用于绘制组蛋白修饰和转录因子。该方法依靠靶向抗体的选择来富集与特定蛋白质结合的目标DNA片段。
ATAC-seq是用于转座酶可及的染色质测序的一种测定方法,可确定染色质可及性的区域并绘制DNA结合蛋白的图谱,以鉴定活性启动子,增强子和其他顺式调控元件。该方法通过生成具有50,000个细胞的测序文库,已经改变了基因调控的分析方法。
由于表观遗传学分析通常涉及超低输入DNA,因此从有限的材料构建高质量文库至关重要。罗氏测序解决方案提供了许多用于表观遗传工作流程的目标富集,文库制备和优化文库质量的解决方案。SeqCap®Epi靶标富集试剂盒可通过单碱基分辨率富集用于DNA甲基化评估的靶标。的 KAPA HyperPrep套件 理想地适合于这两个芯片起和甲基SEQ应用,因为它使接头连接的文库和扩增低偏压的更高的产率。这意味着更高的文库多样性,更低的重复率和更统一的覆盖率,尤其是对于低输入样本而言。对于甲基序列研究, KAPA HiFi Uracil + 由于对尿嘧啶残基具有耐受性,HotStart DNA聚合酶对于亚硫酸氢盐转化的文库的扩增至关重要。KAPA HiFi HotStart ReadyMix可用于扩增ATAC-seq和ChIP-seq库,从而改善序列覆盖范围并减少偏差。