五大主流siRNA/miRNA转染试剂大比拼

小分子RNA研究热度不减，从早先的sirna到目前大热的miRNA，一波接一波。对于小分子RNA的转染，大部分研究人员使用的是阳离子或两性分子脂类转染试剂。 转染过程大多很简单：混合核酸和转染试剂，等几分钟，加到细胞中，几天后分析。但是你得做好优化的准备。我们的目标是用恰恰好的试剂导入恰恰好的siRNA，在沉默目的基因的同时又不会产生脱靶效应。但是何谓之恰恰好，这就很难把握。根据细胞类型、汇合度、小分子RNA浓度、平板类型的不同，转染效率可能差异很大，所以你必须得优化。 市场上主流的小RNA转染试剂有Life Technologies的Lipofectamine™ RNAiMAX、Qiagen的HiPerFect、Thermo Scientific的DharmaFECT、罗氏的X-tremeGENE siRNA转染试剂及Bio-Rad的siLentFect™ 等。此次将它们集合起来，并奉上参数和价格，方便大家比较。 1、产品名：Lipofectamine™ RNAiMAX 性价比高! 厂家：Life Technologies(invitrogen) 优点：较低浓度的RNA分子也能带来高的转染效率，在10倍浓度范围内轻松优化 简介：Lipofectamine™ RNAiMAX转染试剂是一款RNAi特异的阳离子脂质体试剂，可以高效地将小分子RNA导入多种细胞类型。尽管Lipofectamine™ RNAiMAX的说明书建议以10nM siRNA 作为优化干扰效果的起始浓度，但是仅用1nM siRNA 也可以获得较好的靶基因干扰效果。 Lipofectamine™ RNAiMAX 转染试剂可以在10倍的浓度范围内获得*大的干扰效果以及优良的细胞存活率，这个特点使得Lipofectamine™ RNAMAX的转染条件极易优化，以便在实验中使用*低的siRNA浓度，从而降低细胞毒性。不过，这款试剂只能用于小RNA的转染，不能用于共转染。如果需要共转染，只能借助经典的Lipo 2000。 操作流程(顺式转染)：用Opti-MEM分别稀释RNA分子和Lipofectamine RNAiMAX，将两者混合，室温下孵育10-20分钟。加入培养细胞中，在37°C孵育24-48小时。 细胞特异的步骤：可在网站上搜索到，地址为：www.invitrogen.com/RNAi。按照细胞系名称排列，找起来还算方便，但DNA和RNA的转染都混在一起，还要仔细分分，有时会眼花。 价格：4190元/0.75 ml，7200元/1.5 ml(24孔板的每孔建议用量为1 μl)虽然目录价看上去贵一些，但实际用量较省，因此综合来看性价比较高。 2、产品名：HiPerFect Transfection Reagent 使用方便! 厂家：QIAGEN 优点：细胞存活率高，快速反式转染，适合高通量的RNAi筛选，细胞特异的步骤详细 简介：HiPerFect Transfection Reagent是一种阳离子和中性脂类的独特混合物，能实现高效的siRNA吸收和细胞内siRNA的高效释放，即便使用低浓度的siRNA，也能产生高的基因knockdown。HiPerFect Transfection Reagent非常适合高通量的反式转染，也适合miRNA研究。 操作流程(传统步骤)：用不含血清的培养基稀释siRNA，加入HiPerFect转染试剂，在室温下孵育5-10分钟。逐滴加入细胞，在正常条件下培养，监控基因沉默。 细胞特异的步骤：使用手册中详细列出了几大类细胞的实验步骤，包括贴壁细胞、悬浮细胞和巨噬细胞，以及原代细胞。例如Jurkat、HUVEC、上皮细胞、平滑肌细胞等常用细胞的转染步骤，无需在网上费力搜索，都可在使用手册中轻松找到。另外，还有一些原代细胞培养和转染的建议。如果你的细胞未包括在实验手册上，那么可在转染细胞数据库(www.qiagen.com/TransfectionCellDatabase)中查找，也相当方便。 价格：530元/0.1 ml，1670元/0.5 ml，2960元/1 ml，10450元/4×1 ml(24孔板的每孔建议用量3 μl) 3、产品名：X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent 适合共转染! 厂家：Roche 优点：高效转染siRNA，siRNA或siRNA-质粒的共转染，灵活性高 简介：X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent是一个基于脂质体的、并经过优化的转染试剂。虽说名字上写着siRNA，但它也能用于siRNA和表达质粒的共转染。它能和小干扰 RNA(siRNA)或siRNA/质粒DNA混合物形成复合物，并高效地转入动物细胞，引发相应的基因沉默。相对较小的细胞内毒性，确保观测到的细胞效应仅同转染或共转染的siRNA相关。有无血清均可进行转染，转染后无需进行换液操作。 操作流程：用无血清Opti-MEM分别稀释X-tremeGENE siRNA 转染试剂和siRNA，混合并在室温下孵育15-20分钟。加入细胞，监控干扰效果。 细胞特异的步骤：在罗氏的转染数据库中，可以根据细胞名称搜索相关的转染步骤，使用下拉菜单，比较方便。但网站上没有提供具体的步骤，而是链接到相关文献，需要自己再去找。 价格：2411元/1 ml，10256元/5×1 ml(24孔板的每孔建议用量为2.5 μl) 4、产品名：DharmaFECT 1、2、3、4 Transfection Reagent 选择面广! 厂家：Thermo Fisher Scientific 优点：有4种试剂可供选择，选择面广 简介：DharmaFECT 的阵营*为强大，以4敌1，自然占尽上风。众所周知，单一的转染试剂不可能满足上百种细胞系对siRNA的转染要求;因此，Dharmacon通过对上百种细胞系/株逐个筛选和优化，开发出了*适合特定细胞系/株的转染试剂，满足更大范围的细胞系/株对siRNA的高效转染需求。不过，一下子来了四种，选择起来也有点麻烦。幸好，Dharmacon根据客户的使用反馈情况收录了这4种转染试剂对绝大部分细胞的成功转染情况，整理成表，供客户参考选择。 操作流程(共转染)：用无血清培养基稀释siRNA和DharmaFECT转染试剂，室温孵育5分钟，混合后室温孵育20分钟，加入无***的完全培养基。换成转染培养基，在37°C孵育24-48小时或更长。 价格：1200元/0.2 ml，3300元/0.75 ml，5400元/1.5 ml(24孔板的每孔建议用量为0.25-2.5 μl) 5、产品名：siLentFect™ reagent 便宜! 厂家：Bio-Rad 索取资料 简介：siLentFect专门为RNA干扰实验设计，可将小分子干扰RNA高效转入培养的哺乳动物细胞。 siLentFect**的siRNA 吸附能力和高效的转化效率可以在使用低转染试剂剂量和低siRNA浓度的条件下实现目的基因的沉默。siLentFect 脂质试剂能够有效地将siRNA 转到很多细胞系中，包括难于转染的初代细胞和非标准细胞系如 MCF–7 等。siLentFect 对siRNA高的吸附能力确保每次实验使用较少的脂质试剂和较少的siRNA 用量，降低了脱靶效应的可能性，同时也减少了花费。它也可以用于siRNA和质粒DNA的共转染。 操作流程：用无血清培养基分别稀释siLentFect转染试剂和siRNA，混合并在室温下孵育20分钟。加入细胞，监控干扰效果。 细胞特异的步骤：暂无。说明书上只列出了一般的操作步骤，建议以此为起点自行优化。 价格：2275元/0.5 ml，3733元/1.0 ml(24孔板的每孔建议用量为0.75 μl) 转染试剂的比较本身就是一件很难的事情，因为甲之砒霜，乙之蜜糖，很难评出一个综合优越。大家可以根据有无细胞特异的步骤、价格、共转染等要求来综合选择一个。希望本文对您的选择有小小帮助，也欢迎您将使用情况反馈给我们。上一篇：细胞转染实验成功的关键因素分析下一篇：Merck PSE元素周期表APP