pcDNA3.1 TOPO蛋白表达载体咨询

实验需要在真核细胞表达一个DNA病毒的蛋白，但没有特异性的抗体可以用来做WB检测。因此打算用到英杰公司的pCDNA3.1表达载体，载体特性如下：

载体的部分序列信息如下图：

目的序列经TA克隆插入到上图“PCRProduct”处，目的序列C端有V5和多聚组氨酸标签。

现问题如下

1.在WB检测时打算使用抗V5抗体来检测目的序列是否表达出目的蛋白，不知道是否可行？

2.载体的启动子至“PCRProduct”之间没有ATG起始密码子，我插入的目的序列是否需要自带ATG密码子？如果需要自带ATG密码子，那么前期PCR扩增目的序列的时候，ATG之前不可避免的会带有几个不相干的碱基序列，是否必须为3的倍数关系(如CCCATG）？，如果不是3的倍数（如CATG或CCATG）会不会影响蛋白的表达起始点？

3.插入目的序列是否需要自带终止密码子？如果自带终止密码子，那么会不会导致V5表位和多聚组氨酸无法表达？？

挽尊，，

吃土少女wwn 挽尊，，没人回答。。。白送

展开引用战无双x 吃土少女wwn 挽尊，，没人回答。。。白送......1.用v5抗体杂应该没问题2.atg需要自己加在目的序列里面，别忘了带kozac序列，其他的不用顾虑3.当然要删除目的基因自带的终止密码子啊