求教各位?我想构建MiRna的过表达载体,然后在细胞水平研究基因表达。
1.请问应该怎么选择载体?使用质粒载体还是慢病毒载体,这个怎么选择?
2.扩增用的感受态细胞都是大肠杆菌吗?
3、扩增到什么情况下,可以导入我想要研究的这种细胞内?换句话说,我怎么知道是否成功构建了过表达的克隆?
第一次做这方面的不太懂,恳请大家不吝赐教、
大家帮帮忙~谢谢
1. 使用普通的过表达载体或者病毒载体都可以,病毒载体后期可以做成病毒,用于做稳转;2. 是3. 扩增好了摇菌抽质粒,进行后续试验,都有成熟的试剂盒。有些细胞不容易被转染,就得考虑做病毒。构建成功的质粒可以通过测序验证。